Différence entre le clonage et le sous-clonage

Différence clé - clonage vs sous-clonage
 

Le clonage et le sous-clonage sont des procédures de biologie moléculaire qui créent des cellules ou des organismes génétiquement identiques portant l’ADN ou le gène présentant un intérêt. Le clonage est une technique qui implique l’insertion du gène ou de l’ADN intéressé dans un vecteur, sa réplication au sein d’une bactérie hôte et la production de cellules ou d’organismes qui sont des copies fidèles de la constitution génétique. Le sous-clonage est une technique qui implique l’insertion du gène d’intérêt déjà inséré dans un vecteur dans un vecteur secondaire, sa réplication dans une bactérie hôte et la production de copies génétiquement identiques de cellules ou d’organismes. La principale différence entre le clonage et le sous-clonage est que, lors du clonage, le gène d'intérêt, une fois ligaturé dans un vecteur, poursuit le processus de clonage, tandis que dans le sous-clonage, le gène d'intérêt déjà cloné est séparé du vecteur parent et inséré à nouveau dans un vecteur receveur, puis poursuit le processus..

CONTENU
1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que le clonage?
3. Qu'est-ce que le sous-clonage?
4. Comparaison côte à côte - clonage ou sous-clonage
5. Résumé

Qu'est-ce que le clonage??

Le clonage est la procédure qui produit des organismes ou des cellules génétiquement identiques. Dans la nature, le clonage a lieu dans les moyens de reproduction asexuée. Lorsqu'il n'y a pas de recombinaison ou d'altération génétique, les cellules filles reçoivent la même composition génétique que le parent. Les organismes procaryotes et eucaryotes créent des clones par fission binaire, bourgeonnement, mitose, etc. En biologie moléculaire, les gènes de clonage ou des fragments spécifiques d'ADN sont une méthode populaire pour étudier la structure et la fonction de cette section d'ADN particulière..

L'objectif principal du clonage moléculaire est de réaliser des millions de copies de cellules ou d'organismes génétiquement identiques portant le fragment d'ADN d'intérêt (principalement des gènes). Il crée des organismes avec des copies génétiques exactes d'un autre. Principalement, des gènes spécifiques sont clonés dans des études moléculaires pour obtenir des informations structurelles et fonctionnelles et pour le séquençage de l'ADN. En outre, pour la production de protéines ou de produits spécifiques à grande échelle, le clonage est largement utilisé..

Procédure de clonage

Les étapes de base de la procédure de clonage sont les suivantes.

1. Identification et isolement du gène d'intérêt. (Amplification du gène d'intérêt par PCR).
2. Digestion de restriction du gène d'intérêt (l'endonucléase de restriction coupe le gène).
3. Digestion de restriction de l'ADN du vecteur. (L'ADN de vecteur est également coupé en utilisant la même endonucléase de restriction).
4. Insertion du gène dans le vecteur et formation de la molécule recombinante.
5. Transformation du vecteur recombinant dans une bactérie hôte.
6. Isolement et identification des bactéries transformées (le vecteur plasmidique doit contenir un gène sélectionnable, le plus souvent un gène de résistance aux antibiotiques permettant de cribler les bactéries transformées).
7. Expression du gène recombinant dans l'hôte.

Figure_01: Procédure de clonage

Qu'est-ce que le sous-clonage??

Le sous-clonage est une procédure consistant à déplacer un gène d'intérêt d'un vecteur à un autre afin de voir l'expression du gène afin d'obtenir la fonctionnalité souhaitée du gène. Dans cette méthode, deux vecteurs sont impliqués; à savoir, vecteur parent et vecteur de destination. Les inserts clonés sont à nouveau déplacés dans un deuxième vecteur en sous-clonage. L'objectif du transfert du gène du premier vecteur au second vecteur est d'obtenir quelque chose qui ne pourrait pas être réalisé par le premier vecteur ou de séparer à nouveau un gène dans le fragment d'ADN déjà cloné et de l'exprimer seul. Les enzymes de restriction sont utilisées dans cette procédure au début.

Procédure de sous-clonage

Les étapes de base du sous-clonage sont les suivantes.

1. A l'aide d'endonucléases de restriction, séparation de l'ADN d'intérêt dans le plasmide donneur (vecteur parent).
2. Amplification de l'ADN d'intérêt par PCR.
3. Purification du produit de PCR (ADN d'intérêt) par électrophorèse sur gel.
4. Ouverture du plasmide receveur par les mêmes endonucléases de restriction utilisées pour séparer l'ADN d'intérêt dans le plasmide parent.
5. Ligation de l'ADN d'intérêt (gène) dans le plasmide receveur pour créer le plasmide sous-cloné.
6. Transformation du vecteur sous-cloné en une bactérie hôte compétente.
7. Criblage de cellules transformées.
8. Purification de l'ADN plasmidique et utilisation pour le séquençage de l'ADN ou l'expression des gènes pour obtenir les produits désirés.

Le sous-clonage est effectué à l'occasion de l'isolation d'un gène du groupe de gènes cloné ou lorsque le gène d'intérêt doit être transféré dans un plasmide utile pour voir la fonction exacte du gène d'intérêt..

Figure_02: Procédure de sous-clonage

Quelle est la différence entre le clonage et le sous-clonage?

Clonage vs sous-clonage
Le clonage est la procédure qui produit des organismes ou des cellules génétiquement identiques..	Le sous-clonage est une procédure consistant à déplacer un gène d'intérêt d'un vecteur à un autre afin de voir l'expression du gène afin d'obtenir la fonctionnalité souhaitée du gène..
Processus
Séparer l'ADN d'intérêt de l'organisme et l'insérer dans un vecteur une fois et le cloner	L’ADN déjà cloné est séparé du premier vecteur et inséré dans un second vecteur puis cloné.
Insérer un mouvement via des vecteurs
Ne déplace pas les inserts (ADN d'intérêt) d'un vecteur à un autre.	Déplacer des inserts du vecteur parent au vecteur de destination.

Résumé - Cloning vs Subcloning

Le clonage crée des cellules ou des organismes génétiquement identiques avec le gène ou l'ADN d'intérêt inséré. Elle procède à la séparation et à l'insertion de l'ADN d'intérêt dans un vecteur et à l'expression dans une bactérie hôte. Le sous-clonage partage les mêmes étapes que le clonage. Cependant, dans le sous-clonage, un fragment d’ADN déjà cloné (gène d’intérêt) est inséré dans un vecteur et transformé en une bactérie hôte. Telle est la principale différence entre le clonage et le sous-clonage.

Références

1. Lodish, Harvey. «Clonage d'ADN avec des vecteurs plasmidiques». Molecular Cell Biology. 4ème édition. Bibliothèque nationale de médecine des États-Unis, 1er janvier 1970. Web. 05 mars 2017
2. «Sous-clonage». Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 février 2017. Web. 06 mars 2017
3. «Sous-clonage». Sous-clonage | Articles en libre accès | Journaux Open Access | Actes de la conférence | Editeurs | Les auteurs | Relecteurs événements scientifiques. N.p., n.d. Web. 06 mars 2017
4. Wackerhage, Henning. "Comment sous-cloner." Comment sous-cloner. N.p., 01 janvier 1970. Web. 06 mars 2017

Courtoisie d'image

1. Procédure de clonage moléculaire - par CNX OpenStax [CC BY 4.0], via Wikimedia Commons
2. Procédure de sous-clonage - Par le fichier téléchargeur original était Takometer sur Wikipedia anglais (transféré de en.wikipedia à Commons.) [CC BY 2.5], via Wikimedia Commons