Différence entre PCR et PCR en temps réel

PCR vs PCR en temps réel

La réaction en chaîne de la polymérase ou PCR est une découverte révolutionnaire de la biologie moléculaire moderne, développée par le chimiste Kary Mullis en 1983. Elle permet d’amplifier une séquence unique d’un ADN complexe pour analyse. L'idée de base de la PCR est que deux amorces, qui sont complémentaires des brins opposés d'une séquence d'ADN, sont orientées l'une vers l'autre; les amorces produisent des brins complémentaires, chacun contenant l'autre amorce. Par conséquent, le résultat est une grande quantité d'une séquence correspondant à l'ADN situé entre les deux amorces. L'ADN polymérase est utilisée pour étendre les amorces en PCR. L'ADN polymérase est une enzyme thermostable qui a la capacité de survivre à des températures élevées (94 à 95 ° C) utilisée pour la dénaturation de l'ADN matrice..

La PCR implique trois étapes, à savoir les cycles répétés de dénaturation, le recuit des amorces et la synthèse de l'ADN. Un thermocycleur est utilisé pour effectuer cette réaction afin qu’il puisse être programmé pour changer les températures rapidement et avec précision. Les applications de la PCR sont les enquêtes criminelles, les empreintes génétiques, la détection des agents pathogènes et l'analyse de l'ADN des espèces humaines précoces.

Qu'est-ce que la PCR conventionnelle??

La PCR conventionnelle comporte trois grandes étapes: Stade d'amplification de l'ADN, séparation de la PCR et détection des produits. La séparation des segments d'ADN est généralement effectuée par électrophorèse sur gel d'agarose. Les produits sont ensuite colorés au bromure d’éthéiduime. Enfin, la détection est réalisée par visualisation de bandes sur des gels sous lumière UV. Par conséquent, les résultats finaux de la PCR conventionnelle ne sont pas exprimés en chiffres. Normalement, la PCR classique ne peut détecter qu'un seul paramètre.

Qu'est-ce que la PCR en temps réel??

La PCR en temps réel peut détecter l’amplification des produits, au fur et à mesure de leur synthèse. Avec le développement de la technologie, la PCR est devenue une technique très populaire, en particulier pour la détection et l'identification de bactéries dans les aliments. La PCR en temps réel utilise un système de colorant fluorescent et un thermocycleur équipé d'une capacité de détection par fluorescence.

Quelle est la différence entre le PCR conventionnel et le PCR en temps réel??

• La PCR conventionnelle prend plus de temps car elle utilise l'électrophorèse sur gel pour analyser les produits de PCR amplifiés. En revanche, la PCR en temps réel prend moins de temps, car elle peut détecter les amplifications pendant les premières phases de la réaction..

• La PCR en temps réel collecte les données à la phase de croissance exponentielle de la PCR tandis que la PCR traditionnelle collecte les données au point final de la réaction..

• Les résultats finaux de la PCR conventionnelle peuvent ne pas être très précis, mais les résultats de la PCR en temps réel sont très précis..

• La PCR en temps réel est plus sensible que la PCR conventionnelle.

• La résolution classique de la PCR est très faible, tandis que la PCR en temps réel détecte très peu de changements en raison de la résolution élevée..

• La détection de point final de la PCR conventionnelle a une plage dynamique courte, tandis que la détection PCR en temps réel a une plage dynamique large.

• Contrairement à la PCR classique, les techniques de détection automatisées sont utilisées dans la PCR en temps réel..

• La PCR conventionnelle est très sophistiquée et demande beaucoup de travail plus que la PCR en temps réel.

• Contrairement à la PCR en temps réel, la PCR conventionnelle ne peut pas distinguer les bactéries mortes des bactéries vivantes..

• La PCR en temps réel utilise un système de colorant fluorescent pour détecter les produits, tandis que la PCR classique utilise du bromure d'éthidium et de la lumière UV pour visualiser les bandes dans le milieu de gel d'agarose..