Différence entre la trypsinisation chaude et froide

Différence clé - Warm vs Du froid Trypsinisation
 

La trypsination tiède et la trypsinisation à froid sont deux méthodes utilisées dans la désagrégation enzymatique de cellules en culture de cellules animales. le différence clé entre les trypsinisations tiède et froide, comme le suggèrent leurs noms, dépend de la température à laquelle la trypsine est ajoutée pour la désagrégation cellulaire. La trypsination à chaud a lieu dans des conditions de température élevée (36,5 - 37 ⁰C) alors que la trypsination à froid a lieu dans des conditions de basse température.

Au cours du processus de culture cellulaire primaire de cellules animales, trois méthodes principales ont été utilisées et ont fait leurs preuves. Les trois méthodes incluent la désagrégation mécanique des cellules, la désagrégation enzymatique des cellules et la technique de l'explant primaire. La désagrégation enzymatique des cellules conduisant à l'isolement des cellules est effectuée par l'enzyme de dégradation des protéines, la trypsine. Par conséquent, ce processus est connu sous le nom de trypsinisation. La trypsinisation peut être effectuée dans deux conditions différentes, à savoir la trypsinisation à chaud et la trypsinisation à froid. La trypsination à chaud est la méthode de traitement des cellules à la trypsine dans des conditions chaudes à une température de 36,5 à 37 ⁰C. La trypsination à froid est le processus de traitement à la trypsine qui a lieu dans des conditions plus froides, de préférence dans la glace en maintenant de très basses températures..

CONTENU

1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que la trypsination tiède?
3. Quelle est la trypsinisation à froid
4. Similitudes entre la trypsinisation chaude et froide
5. Comparaison côte à côte - Trypsinisation chaude ou froide sous forme tabulaire
6. Résumé

Qu'est-ce que la trypsination tiède??

La trypsinisation peut être effectuée pour désagréger les composants cellulaires afin d'isoler les cellules afin de produire une culture cellulaire primaire. La trypsine est une enzyme de dégradation des protéines, et le mélange d’enzymes utilisé dans la trypsinisation peut être un extrait brut ou un produit purifié. On dit que l'extrait brut est plus efficace pour la lyse des protéines et la désintégration des cellules, car il contient d'autres enzymes dégradables..

La trypsination à chaud est la méthode enzymatique la plus couramment utilisée pour la désagrégation cellulaire qui a lieu dans des conditions de température plus élevées. Avant le traitement par trypsination, le tissu souhaité est coupé en morceaux plus petits. Cela facilite le processus de désagrégation facile. Le tissu coupé est ensuite lavé dans un milieu spécial appelé milieu Dissection Basal Salt..

Au terme de l'étape de lavage, les cellules sont transformées dans un ballon contenant l'enzyme active, la trypsine. Comme cette technique implique un protocole de trypsination à chaud, la trypsine est placée à une température d'environ 37 ⁰C pendant environ quatre heures.

Figure 01: Trypsine

Le contenu est mélangé et agité en utilisant des méthodes de centrifugation pour faciliter le protocole et accélérer le processus de désagrégation. Une fois que le temps recommandé est atteint, les cellules peuvent être dérivées du surnageant. Les cellules dérivées du surnageant sont ensuite incubées à une température et à un temps particuliers..

Quelle est la trypsinisation à froid?

La trypsinisation à froid est l'autre type de trypsinisation qui se produit par temps froid. Dans cette technique, les cellules qui sont hachées et lavées sont placées dans des flacons sur de la glace, puis imbibées de trypsine. La période de trempage est beaucoup plus longue - environ 6 à 24 heures.

Une fois la procédure de trempage terminée, la trypsine est retirée du lysat cellulaire et les fragments de tissu sont ensuite incubés à 37 ° C. ⁰C pendant environ 20-30 minutes. La désagrégation des cellules est obtenue par pipetage répété du mélange de tissus. Cela permettra aux cellules de se dissocier de la membrane et d’arriver au surnageant. Une fois que les cellules sont dans le surnageant, elles sont incubées et cultivées à une température et une durée souhaitées..

La méthode de trypsination à froid présente plusieurs avantages

• Un rendement plus élevé en cellules viables car les dommages aux cellules sont minimisés. Les dommages aux cellules sont minimisés en n'utilisant pas d'étapes de centrifugation.
• Méthode très pratique.
• Moins laborieux.

La principale limitation de la méthode de trypsinisation à froid est que de grandes quantités ne peuvent pas être utilisées dans un cas.

Quelles sont les similitudes entre la trypsinisation chaude et froide?

• Les procédés de trypsinisation à chaud et à froid utilisent l’enzyme trypsine pour la désagrégation des cellules..
• Les procédés de trypsinisation à chaud et à froid sont utilisés dans les procédures de culture cellulaire pour la désagrégation des cellules.
• Dans les procédures de traitement à la trypsination tiède et à la froid, les cellules sont dérivées du surnageant.

Quelle est la différence entre la trypsinisation chaude et froide?

Trypsinisation chaude vs froide
La trypsination à chaud est la méthode de traitement des cellules à la trypsine dans des conditions chaudes à une température de 36,5 à 37 0.	La trypsination à froid est le processus de traitement à la trypsine qui a lieu dans des conditions plus froides, de préférence dans la glace en maintenant de très basses températures..
Protocole
Les morceaux de tissus coupés sont maintenus à 37 0C tout au long de la procédure.	Les morceaux de tissu coupés sont d'abord maintenus à des températures froides, puis à 37 ° C. 0.
Température
La trypsination à chaud se produit entre 36,5 et 37 0	La trypsination à froid se produit par temps froid.
Le temps consommé
Moins de temps requis pour l'ensemble du processus (environ 4 heures) de trypsination à chaud.	Temps plus long nécessaire (environ 6 à 24 heures) pour la trypsinisation à froid.
Rendement des cellules viables
Trypsinisation tiède.	Trypsinisation à froid élevée.
Utilisation de la centrifugation
La centrifugation est nécessaire pour la désagrégation des cellules lors de la trypsination à chaud.	La centrifugation n'est pas nécessaire dans la trypsinisation à froid.
Quantité tissulaire initiale pour la trypsination
Une plus grande quantité de tissu peut être utilisée dans la trypsination à chaud.	Une plus petite quantité de tissu peut être utilisée dans la trypsinisation à froid.
Dommages cellulaires
Élevée en raison de la centrifugation dans la trypsinisation à chaud.	Moins en raison de la trypsinisation à froid.

Résumé - Chaud vs Du froid Trypsinisation

La trypsinisation est la méthode d'utilisation de l'enzyme de dégradation des protéines, la trypsine, pour la désagrégation et la préparation de cultures de cellules primaires au cours du processus de culture cellulaire. Il existe deux techniques principales de trypsinisation basées sur les températures utilisées au cours de la procédure. Ce sont des trypsinisations chaudes et froides. La trypsination à chaud est réalisée à 37 ⁰C alors que la trypsination à froid est réalisée dans des conditions de glace. Bien que la trypsination à froid prenne plus de temps, elle aurait un rendement plus élevé en cellules viables. Cela est dû au fait que les dommages aux cellules sont minimisés lors de la trypsinisation à froid, car ils n’utilisent pas d’étapes de centrifugation vigoureuses. C’est la différence entre la trypsinisation chaude et froide.

Référence:

1. «Trypsinisation». Trypsinization - un aperçu | Sujets ScienceDirect. Disponible ici 
2. «Culture cellulaire primaire: 3 techniques (avec schéma)». Discussion en biologie, 16 octobre 2015.. Disponible ici  

Courtoisie d'image:

1.'Trypsin site actif'Par Fdardel - Travail personnel, (CC BY-SA 3.0) via Wikimedia Commons