Différence entre l'ADN ligase T4 et T7

Différence clé - ADN ligase T4 vs T7
 

L'ADN ligase est une enzyme importante utilisée dans les techniques de biologie moléculaire. Il fonctionne comme une colle moléculaire pour joindre les nucléotides en formant des liaisons phosphodiester entre les nucléotides. Les liaisons phosphodiester sont formées entre l'extrémité hydroxyle en 3 'du fragment sucre et le groupe phosphate en extrémité 5'. L’ADN ligase est vitale dans le processus de réplication pour joindre les fragments d’Okazaki du brin en retard et pendant les mécanismes de réparation de l’ADN et in vitro expériences de clonage pour joindre le gène d’intérêt souhaité au génome du vecteur. Les biologistes moléculaires utilisent actuellement deux ADN ligases principales: les ADN ligases T4 et T7.. La T4 ADN ligase est l'une des premières enzymes à être isolée du bactériophage T4. L’ADN ligase T7, qui est une protéine plus petite, est une enzyme isolée du bactériophage T7.. C’est la principale différence entre les ADN ligases T4 et T7.

CONTENU

1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Quelle est l'action de l'ADN ligase
3. Qu'est-ce que l'ADN ligase T4?
4. Qu'est-ce que l'ADN ligase T7?
4. Similarités entre l'ADN ligase T4 et T7
5. Comparaison côte à côte - ADN ligase T4 vs T7 sous forme tabulaire
6. Résumé

Quelle est l'action de l'ADN ligase?

La ligature de l'ADN se produit dans une réaction en trois étapes. La première étape est une attaque nucléophile de l’alpha-phosphore de l’ATP, générant un intermédiaire enzyme-adénylate covalent dans lequel l’AMP est lié à l’azote de la lysine, une chaîne latérale terminale. Dans la deuxième étape, une attaque nucléophile se produit sur le phosphore de l'enzyme-adénylate par le substrat d'ADN à l'extrémité 5'-phosphate, libérant de la lysine et formant un ADN-adénylate. Dans la dernière étape, l’ADN-adénylate est attaqué par 3'-OH d’un autre brin d’ADN, libérant de l’AMP et reliant les polynucléotides..

Qu'est-ce que l'ADN ligase T4??

La T4 Ligase a été la première ligase à être isolée et identifiée par Meselson, Weigle et Kellenberger et la première ligase commerciale produite. L'ADN ligase T4 est une enzyme dépendante de l'ATP qui catalyse la formation de la liaison phosphodiester. C'est une chaîne polypeptidique unique avec 487 résidus d'acides aminés et a un poids moléculaire d'environ 77 kDa. Le pH optimal pour son activité est compris entre 7,5 et 8.

Figure 01: ADN ligase T4

Comme son nom l'indique, l'ADN ligase de T4 est présent dans le bactériophage T4 et a été isolé lorsque le phage a produit l'enzyme lors d'une infection par -E. coli. L'enzyme ligature des duplex d'ADN double brin avec des extrémités franches et les fragments à lier doivent être très proches les uns des autres.

Qu'est-ce que l'ADN ligase T7??

La ligase T7 est une protéine de 41 kDa produite par le bactériophage T7 et est isolée par infection E. coli cellules. La fonction principale de la ligase T7 est de ligaturer des duplex d'ADN par le biais de liaisons phosphodiester et de joindre des fragments d'ADN proches lors d'expériences de clonage. Le pH optimal de l'ADN ligase T7 est compris entre 7,0 et 7,2. La ligase T7 est dépendante de l'ATP. Les ADN ligases T7 sont également capables d'anneler des hybrides ADN et ARN, donnant lieu à des conformations anormales lors de la transcription; Cependant, ce phénomène est encore à l’étude par in vitro études.

Quelles sont les similitudes entre l'ADN ligase T4 et T7?

• L'ADN ligase T4 et T7 participe à une réaction de ligature en annelant des duplex d'ADN par la formation d'une liaison phosphodiester entre l'extrémité 3 'OH et l'extrémité phosphate 5' du fragment d'ADN..
• Les deux enzymes se lient aux duplex d’ADN aux extrémités franches qui sont proches les uns des autres.
• Les deux enzymes dépendent de l'ATP.
• Ces enzymes sont isolées en infectant E. coli cellules avec le bactériophage particulier.
• Les applications des deux enzymes comprennent:
  • Clonage moléculaire - pour lier le gène d'intérêt au vecteur
  • Réparation de l'ADN - pour réparer des niches à double brin
  • Réplication d'ADN in vitro
  • Réaction en chaîne de la ligase

Quelle est la différence entre l'ADN ligase T4 et T7?

ADN ligase T4 vs T7
ADN ligase de type T4 ADN ligase isolée à partir du bactériophage T4 et est impliquée dans la ligature de fragments d'ADN adjacents via la formation de liaisons phosphodiester.	ADN ligase de type T7 de l'ADN ligase isolée du bactériophage T7 et est impliquée dans la ligature de fragments d'ADN adjacents via la formation de liaisons phosphodiester.
Taille de la protéine
La taille de l'ADN ligase T4 est de 77 kDa - plus grande que celle de l'ADN ligase T7.	La taille de l'ADN ligase T7 est de 41 kDa.
PH optimal
La plage de pH utilisée par l'ADN ligase T4 est comprise entre 7,5 et 8,0..	La plage de pH qui convient à l'ADN ligase T7 est 7,0 - 7,2.

Résumé - ADN ligase T4 vs T7

Les ADN ligases constituent une classe importante d'enzymes impliquées dans le clonage moléculaire afin de produire des molécules d'ADN recombinant contenant le gène d'intérêt. La réaction de ligature est une réaction consommant de l'énergie et de nouvelles études de recherche sont en cours pour améliorer la précision via la modulation des ligases disponibles. Les ADN ligases T4 et T7 sont deux types d’enzymes ADN ligase importantes utilisées dans les techniques de biologie moléculaire. L’ADN ligase T7 est également le résultat de recherches basées sur la ligase primaire isolée à partir de virus infectés par la T4. E. coli. T7 représente plus d'efficacité et de précision dans l'exercice de ses fonctions en raison de sa taille réduite. C’est la différence entre la ligase T4 et T7.

Téléchargez la version PDF de l'ADN ligase T4 vs T7

Vous pouvez télécharger la version PDF de cet article et l'utiliser à des fins hors ligne, conformément aux notes de citation. Veuillez télécharger la version PDF ici Différence entre les ligases T4 et T7.

Références:

1. «DNA Ligase, T4.» DNA Ligase, T4 - Worthington Enzyme Manual, Disponible ici. Consulté le 22 août 2017.
2. Doherty, Aidan J. et al. "SUREXPRESSION, PURIFICATION, CRISTALLISATION ET CARACTÉRISATION DE L'ADN ligase du bactériophage T7." Journal of Biological Chemistry, 10 mai 1996, Disponible ici. Consulté le 22 août 2017.

Courtoisie d'image:

1. «Figure 3. Ligase ADN Ligase ADN T4 simple brin d'ARNm-Splint Aid.» (CC BY 3.0) via Wikimedia Commons