La transfection est un processus impliqué dans le transfert de gène de cellules eucaryotes par des méthodes chimiques ou physiques. La transfection peut être classée en deux types principaux nommés transfection transitoire et transfection stable. Au cours de la transfection transitoire, le gène d’intérêt ne parvient pas à s’intégrer au génome de l’hôte et s’exprime temporairement dans l’hôte pour un court terme, tandis que dans une transfection stable, le gène d’intérêt s’intègre au génome de l’hôte et est maintenu pendant plusieurs générations.s. C'est la principale différence entre transfection transitoire et transfection stable. Dans les deux cas, la transfection est réussie et les gènes sont exprimés.
CONTENU
1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que la transfection transitoire?
3. Qu'est-ce qu'une transfection stable?
4. Comparaison côte à côte - Transfection vs transfection stable
5. Résumé
La transfection est un outil important pour l'insertion de gènes dans des cellules eucaryotes. Parmi les deux types de transfection, la transfection transitoire est un moyen courant de transfert de gène. À travers un vecteur, des gènes étrangers sont transformés à l'intérieur des cellules hôtes. Une fois que l'ADN étranger entre dans la cellule hôte, il dispose de deux options. Il peut soit s'intégrer au génome de l'hôte et se répliquer, soit rester à l'intérieur sans s'intégrer au génome. La transfection transitoire présente l'expression temporaire des gènes insérés sans s'intégrer dans le génome de l'hôte. Les gènes expriment et produisent la protéine codée jusqu'à la division de la cellule. Cependant, en raison de l'incapacité d'intégration, il ne peut pas se répliquer et entrer dans les générations futures. Ce type de transfection réussit pendant une courte période. Au cours de la division cellulaire ou en raison de certains autres facteurs, l'ADN étranger est soumis à la dégradation. La transfection transitoire est montrée quand l'ADN étranger est sous la forme d'ADN fortement enroulé.
Figure 01: Transfection transitoire
Une transfection stable montre l'intégration réussie d'un gène étranger dans le génome de l'hôte. Une fois que l'ADN étranger entre dans la cellule hôte, une partie de l'ADN étranger s'intègre au génome de l'hôte et en devient une partie. Par conséquent, l'ADN étranger se réplique également et passe dans les générations futures lorsque le génome de l'hôte se réplique. Ce type de transfection est complexe et rare. Cependant, en raison de la transfection stable dans le génome, ce trait est maintenu pendant une longue période de plusieurs générations.
La transfection stable est un processus difficile qui nécessite une administration efficace de l’ADN et l’acquisition cellulaire de l’ADN étranger dans son génome. Par conséquent, l'ADN linéaire favorise la transfection stable par rapport à l'ADN circulaire. Cependant, le taux de transfection stable est d'environ un sur dix4 cellules transformées. La transfection stable peut être observée par la cotransfomation d'un marqueur sélectionnable et l'exécution de la sélection artificielle sur un milieu.
Figure 02: Transfection stable
Transfection vs Transfection Stable | |
L'ADN étranger ne s'intègre pas dans le génome de l'hôte. | L'ADN étranger s'intègre au génome de l'hôte et en fait partie. |
Réplication dans l'hôte | |
Les gènes transfectés de manière transitoire ne se répliquent pas dans l'hôte. Par conséquent, les gènes ne sont pas transmis aux générations suivantes. | Les gènes sont répliqués dans l'hôte et transmis aux générations futures. |
Durée de l'expression génique | |
Les gènes sont exprimés pour une période de temps finie et ensuite détruits. | Les gènes deviennent une partie du génome et sont exprimés au sein de la génération pendant une longue période. |
Utilisation | |
Ceci est utile pour étudier les effets de l’expression à court terme de gènes ou de produits de gènes.. | Ceci est utile pour étudier les effets des expressions géniques à long terme. |
Détection de la transfection | |
Les gènes sont exprimés et peuvent être facilement détectés en insérant un gène rapporteur. | Une transfection stable peut être facilement détectée en insérant un marqueur sélectionnable et en effectuant une sélection par sélection artificielle sur un support.. |
Occurrence et processus | |
La transfection transitoire est courante et peu complexe à réaliser. | La transfection stable est rare et complexe à réaliser. |
Nature de l'ADN | |
Les ADN hautement supercoilés conviennent à la transfection transitoire. | Les ADN linéaires conviennent à la transfection stable. |
Applications | |
Ceci est utilisé pour des études sur l'inactivation ou la désactivation de gènes avec des ARN inhibiteurs, la production de protéines à petite échelle. | Ceci est utilisé pour la production de protéines à grande échelle, études pharmacologiques à long terme, thérapie génique, recherche sur les mécanismes de la régulation génétique à long terme |
Les transfections transitoires et stables sont deux types de transfections montrés au cours du transfert du gène dans des cellules eucaryotes par des systèmes non viraux. L'ADN étranger transformé n'est pas intégré au génome de l'hôte dans une transfection transitoire, alors qu'il s'intègre au génome de l'hôte dans une transfection stable. Une transfection transitoire est présentée sur l'ADN enroulé circulaire alors que l'ADN linéaire préfère une transfection stable. C'est la différence entre transfection transitoire et transfection stable. Cependant, la transfection transitoire est plus courante et plus facile que la transfection stable. Mais la sélection d'un parmi deux dépend de la finalité du transfert de gène et de la durée du projet de recherche..
Références:
1. Condreay, J. Patrick, Sam M. Witherspoon, William C. Clay et Thomas A. Kost. «Expression génique transitoire et stable dans des cellules de mammifère transduites avec un vecteur baculovirus recombinant.» Actes de l'Académie nationale des sciences des États-Unis d'Amérique. The National Academy of Sciences, 5 janvier 1999. Web. 25 mars 2017
2. Kim, Tae Kyung et James H. Eberwine. «Transfection de cellules de mammifères: le présent et l'avenir». Chimie analytique et bioanalytique. Springer-Verlag, août 2010. Web. 25 mars 2017