Différence entre l'hybridation de colonies et de plaques

le différence principale l’hybridation de colonies et de plaques est que le L'hybridation de colonies est la méthode utilisée dans la sélection de colonies bactériennes avec les gènes désirés, tandis que l'hybridation sur plaque est la méthode de sélection de phages avec les gènes désirés. En outre, l'hybridation de colonies peut être utilisée dans le criblage de banques à base de plasmides ou de cosmides, tandis que l'hybridation sur plaques peut être utilisée dans le criblage de banques de phages..

L'hybridation de colonies et de plages est deux techniques utilisées dans le criblage de banques génomiques ou d'ADNc. Ils sont aussi appelés ascenseur de la colonie et soulèvement de la plaque respectivement.

Zones clés couvertes

1. Qu'est-ce que l'hybridation de colonies?
     - Définition, type de bibliothèque, méthodes de filtrage
2. Qu'est-ce que l'hybridation des plaques?
     - Définition, type de bibliothèque, méthodes de filtrage
3. Quelles sont les similitudes entre l'hybridation de colonies et de plaques
     - Aperçu des caractéristiques communes
4. Quelle est la différence entre l'hybridation de colonies et de plaques
     - Comparaison des différences clés

Mots clés

Colonie, hybridation de colonies, criblage de bibliothèques, plaque, hybridation de plaques

Qu'est-ce que l'hybridation de colonies?

L'hybridation de colonies est une méthode de criblage utilisée dans la sélection de colonies bactériennes avec une séquence d'ADN souhaitée. On l'appelle aussi hybridation par transfert de colonies, levée de colonies ou réplique de placage. Il permet le criblage de colonies plaquées à haute densité. La procédure originale d'hybridation de colonies a été développée par Grunstein et Hogness. Premièrement, les colonies bactériennes peuvent être transformées sur une membrane et les colonies bactériennes sont lysées, exposant les acides nucléiques. Ensuite, les acides nucléiques exposés sont fixés sur la membrane en les dénaturant et sont hybridés avec les sondes radioactives..

Figure 1: Méthode d'hybridation de colonies

Une colonie est un groupe de bactéries développées à partir d'une cellule bactérienne unique par le biais de la reproduction asexuée. Par conséquent, toutes les cellules bactériennes d'une colonie particulière possèdent la même constitution génétique ainsi que le matériel génétique transformé. Généralement, les bactéries sont transformées à l'aide de vecteurs plasmidiques ou cosmidiques.

Qu'est-ce que l'hybridation des plaques?

L'hybridation sur plaque est la méthode de criblage des phages recombinants. Il s’agit d’une modification de l’hybridation de colonies réalisée par Benton et Devis en 1977. Cette méthode s’appelle également soulèvement de la plaque. La procédure d'hybridation sur plaque est similaire à la procédure d'hybridation sur colonies et les plaques sont soulevées en les mettant en contact avec une membrane de nitrocellulose. Les acides nucléiques sont ensuite exposés et fixés sur la membrane, en s’hybridant avec les sondes désirées..

Figure 2: Plaques sur une plaque d'agar

Une plaque est une zone claire sur une plaque de gélose produite par un bactériophage particulier par la lyse de cellules bactériennes sur cette zone. En raison de la moindre quantité d'ADN transféré sur la membrane de nitrocellulose, l'hybridation sur plaque produit moins de signaux de fond.

Similitudes entre l'hybridation de colonies et de plaques

• L'hybridation de colonies et de plages est deux techniques utilisées dans le criblage de banques génomiques ou d'ADNc..
• Le principe de base dans les deux techniques est l'hybridation d'acide nucléique.
• Les deux méthodes d’hybridation sur filtre permettent le criblage primaire de banques par réplication in Situ sur membrane de nitrocellulose..
• Ils permettent le dépistage haute densité.
• Une molécule d'ADN simple brin est utilisée comme sonde pouvant s'hybrider à sa séquence complémentaire afin d'identifier les séquences spécifiques..
• Les deux techniques d'hybridation sont rapides et peuvent gérer un très grand nombre de clones..
• Ils sont utilisés dans l'identification de séquences de gènes incomplètes, qui ne peuvent pas être exprimées.

Différence entre l'hybridation de colonies et de plaques

Définition

L'hybridation de colonies fait référence à une méthode de sélection de colonies bactériennes avec les gènes désirés, tandis que l'hybridation sur plaque fait référence à une méthode de criblage utilisée dans l'identification de phages recombinants..

Développé par

L’hybridation de colonies a été développée pour la première fois par Grunstein et Hogness, tandis que l’hybridation sur plaque a été développée pour la première fois par Benton et Devis en 1977..

Types de bibliothèques

L'hybridation de colonies implique l'identification de banques basées sur des plasmides ou des cosmides, tandis que l'hybridation sur plaques implique l'identification de banques de phages..

Nombre de remontées

Les colonies peuvent être soulevées une seule fois et les plaques plusieurs fois.

Signaux de fond

L'hybridation de colonies produit davantage de signaux de fond, tandis que l'hybridation sur plaque les détecte moins.

Conclusion

L'hybridation de colonies est une méthode de criblage de colonies bactériennes dans les banques produites avec des vecteurs plasmidiques ou cosmidiques. Par ailleurs, l’hybridation sur plaque est une méthode de dépistage des bactériophages dans les banques de phages. La principale différence entre l'hybridation de colonies et de plaques réside dans le type de banques sélectionnées dans chaque méthode..

Référence:

1. Kaksonen, Anna. «Approches moléculaires pour l'analyse de la communauté microbienne». Lessivage - BioMineWiki, 20 avril 2006, disponible ici
2. Dale, J W et P J Greenaway. "Identification des phages recombinants par hybridation sur plaque." Méthodes en biologie moléculaire (Clifton, N.J.)., Bibliothèque nationale de médecine des États-Unis, disponible ici.

Courtoisie d'image:

1. «Hybridation de transfert» Par Kaksonen - http://wiki.biomine.skelleftea.se/biomine/molecular/index_22.htm (domaine public) via Commons Wikim 
2. “M. smegmatis plaque ”Par Wazzzup7up - Travail personnel (domaine public) via Commons Wikimedia