Quelle est la différence entre les tests ELISA direct et indirect

le différence principale entre ELISA direct et indirect est que dans le test ELISA direct, l'anticorps primaire est directement conjugué à l'enzyme de détection, tandis que dans le test ELISA indirect, un anticorps secondaire complémentaire de l'anticorps primaire est conjugué à l'enzyme de détection.. Cela signifie que l’ELISA direct utilise un seul anticorps, tandis que l’ELISA indirect utilise deux anticorps..

Les méthodes ELISA directe et indirecte sont deux méthodes ELISA (dosage immuno-enzymatique) utilisées pour détecter la présence d’un antigène ou d’un anticorps spécifique dans le milieu..

Zones clés couvertes

1. Qu'est-ce que Direct ELISA?
     - Définition, procédure, caractéristiques
2. Qu'est-ce que l'ELISA indirect?
     - Définition, procédure, caractéristiques
3. Quelles sont les similitudes entre les tests ELISA direct et indirect
     - Aperçu des caractéristiques communes
4. Quelle est la différence entre les tests ELISA direct et indirect
     - Comparaison des différences clés

Mots clés

ELISA direct, Enzyme de détection, ELISA indirect, Anticorps primaire, Anticorps secondaire, Substrat

Qu'est-ce que Direct ELISA?

L'ELISA direct est une méthode d'ELISA permettant la détection de l'antigène avec un anticorps primaire lié à une enzyme. Cette méthode ELISA a été développée pour la première fois par Perlmann et Engvall. Il est considéré comme la forme la plus simple d’ELISA. Les étapes du test ELISA direct sont énumérées ci-dessous:

1. Revêtir la surface de la plaque avec l'échantillon;
2. Incubation de la plaque avec l'anticorps primaire conjugué à une enzyme;
3. Lavage pour l'élimination des anticorps non liés de la plaque;
4. Ajout du substrat requis par la réaction enzymatique;
5. Détection des signaux produits par la plaque.

Ici, les deux principaux types d’enzymes conjugués à l’anticorps primaire sont la HRP (peroxydase de raifort) et la phosphatase alcaline. Les trois types de substrats utilisés avec le HRP sont le OPD (dichlorhydrate de o-phénylènediamine), le TMB (3, 3 ', 5, 5'-tétraméthylbenzidine) et le ABTS (2, 2'-Azinobis [3-éthylbenzothiazoline-6- acide sulfonique] -diammonium). Le substrat utilisé avec la phosphatase alcaline est le PNPP (phosphate de p-nitrophényle, sel disodique). La réaction enzymatique sur le substrat provoque un changement de couleur dans le milieu, qui dépend du type de substrat et de l'enzyme utilisée pour la réaction. Cela facilite la détection des échantillons avec l'antigène cible. 

Figure 1: ELISA direct

Le test ELISA direct convient mieux à la détection de la quantité d'antigène de haut poids moléculaire dans un échantillon. Le nombre réduit d'étapes dans cette méthode ELISA en fait un test plus rapide. Cependant, en raison du coût et du temps nécessaire au marquage de l'anticorps primaire avec des enzymes, l'utilisation de l'ELISA direct est assez rare. D'autre part, il produit des effets indésirables sur l'antigène cible ainsi.

Qu'est-ce que l'ELISA indirect?

L'ELISA indirect est une autre méthode d'ELISA qui utilise deux anticorps pour la détection: l'anticorps primaire et l'anticorps secondaire. Les étapes de l’ELISA indirect sont les suivantes:

1. Revêtir la surface de la plaque avec l'échantillon;
2. Incubation de la plaque avec l'anticorps primaire;
3. Lavage pour éliminer les anticorps non liés de la plaque;
4. Incubation de la plaque avec l'anticorps secondaire conjugué à l'enzyme de détection;
5. Lavage pour éliminer les anticorps non liés de la plaque;
6. Ajout du substrat requis par la réaction enzymatique;
7. Détection des signaux produits par la plaque.

   Figure 2: ELISA indirect

ELISA indirect passe par deux étapes de liaison aux anticorps. D'autre part, l'anticorps secondaire est conjugué à l'enzyme de détection. En général, il existe de nombreux anticorps secondaires conjugués à des enzymes. Ici, l'anticorps secondaire est principalement un anticorps polyclonal anti-espèce. En raison de la disponibilité d'anticorps conjugués à une enzyme, la méthode ELISA indirecte est plus souvent utilisée dans des tests immunologiques pour la détection de parasites, de bactéries et de virus. D'autre part, plusieurs anticorps secondaires peuvent être liés à l'anticorps primaire dans la plaque. Par conséquent, la sensibilité du test est très élevée.

Similitudes entre les tests ELISA direct et indirect

• Les méthodes ELISA directe et indirecte sont deux méthodes ELISA dans lesquelles l’antigène d’intérêt est directement lié à la plaque..
• Les deux méthodes impliquent la détection de la présence d'une molécule de protéine spécifique dans un échantillon. Cette molécule de protéine est directement attachée à la plaque.
• Des plaques à 96 puits ou des tubes à bandes à 8 puits sont utilisés dans les deux méthodes. Ces plaques et ces tubes sont composés de polystyrène. Les plaques à 96 puits offrent de nombreux espaces pour la détermination de la dilution optimale pour la réaction. Dans l’intervalle, les bandelettes à 8 puits conviennent mieux aux essais finement ajustés.

Différence entre les tests ELISA direct et indirect

Définition

Elisa direct fait référence à un type d'ELISA dans lequel l'anticorps primaire est conjugué à l'enzyme de détection, tandis que l'ELISA indirect se réfère à un type d'ELISA dans lequel l'anticorps secondaire est conjugué à l'enzyme de détection.

Nombre d'anticorps utilisés

L'ELISA direct utilise un anticorps, qui est l'anticorps primaire, tandis que l'ELISA indirect utilise deux anticorps, l'anticorps primaire et l'anticorps secondaire. C’est la principale différence entre les tests ELISA direct et indirect.

La détection de l'enzyme est liée à

De plus, l'enzyme de détection est liée à l'anticorps primaire dans l'ELISA direct, tandis que l'enzyme de détection est liée à l'anticorps secondaire dans l'ELISA indirect..

Intensité des signaux

Une autre différence entre les méthodes ELISA directe et indirecte réside dans le fait que les signaux produits par la méthode ELISA directe sont moins intensifs, alors que ceux produits par la méthode ELISA indirect sont plus intensifs en raison de l'amplification du signal..

Signaux de fond

Cependant, l'ELISA direct produit plus de signaux de fond que l'ELISA indirect..

Sensibilité

L'ELISA direct est moins sensible, tandis que l'ELISA indirect est plus sensible. C'est aussi une différence entre les tests ELISA direct et indirect. 

Réactivité croisée

Une autre différence entre ELISA direct et indirect est la réactivité croisée. C'est-à-dire que la réactivité croisée est minimale dans l'ELISA direct, alors qu'elle est significative dans l'ELISA indirect..

Temps

De plus, l'ELISA direct prend moins de temps en raison du nombre réduit d'étapes, tandis que l'ELISA indirect prend plus de temps en raison du doublement des étapes de liaison aux anticorps..

Fréquence d'utilisation

Bien que les tests ELISA directs soient relativement rares, les tests ELISA indirects sont plus fréquents.

Conclusion

Direct ELISA utilise uniquement l'anticorps primaire pour la détection d'un antigène spécifique. Cela signifie que l'anticorps primaire est conjugué à l'enzyme de détection dans l'analyse ELISA directe. Cependant, l'ELISA indirect utilise un anticorps primaire pour se lier à l'antigène tandis que l'anticorps secondaire conjugué à une enzyme se lie à l'anticorps primaire. La méthode ELISA directe est moins fréquente en raison de la moindre disponibilité d'anticorps primaire conjugué à une enzyme. La principale différence entre les tests ELISA direct et indirect est le nombre d'anticorps utilisés.

Référence:

1. «Types d’ELISA» Bio-Rad, Laboratoires Bio-Rad, disponibles ici

Courtoisie d'image:

1. “Diagramme ELISA” de Cavitri - Travail personnel (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia  
2. “ELISA indirect” Par Cawang - Propre travail (CC0) via Commons Wikimedia