Différence entre la chromatographie sur couche mince de papier et la chromatographie sur colonne

Différence clé - Papier vs couche mince vs Colonne Chromatographie
 

La chromatographie sur papier, la chromatographie sur couche mince et la chromatographie sur colonne sont trois types de techniques chromatographiques. le différence clé entre la chromatographie sur papier, la chromatographie sur couche mince et la chromatographie sur colonne sont basées sur le type de phase stationnaire utilisé dans la technique de chromatographie. La chromatographie sur papier utilise un papier de cellulose comme phase stationnaire, la chromatographie en couche mince utilise de l’alumine ou du gel de silice comme phase stationnaire, tandis que la chromatographie sur colonne utilise une colonne garnie d’une matrice appropriée comme phase stationnaire..

Dans le processus de séparation et d'identification de biomolécules telles que les protéines et les glucides, la chromatographie est une technique biophysique importante utilisée. La chromatographie sépare les composés en fonction de leur solubilité, de leur taille et de leur charge. Basé sur le mécanisme de séparation, la chromatographie utilise des mécanismes tels que l'échange d'ions, l'absorption, la séparation et l'exclusion de taille et il existe trois techniques chromatographiques; nommément chromatographie sur papier, sur couche mince et sur colonne. La chromatographie sur papier est basée sur l'adsorption solide-liquide et la solubilité du composé et utilise un papier cellulosique comme phase stationnaire. La chromatographie en couche mince est basée sur l'adsorption de molécules par des solides et des liquides. Il a une phase stationnaire qui est typiquement faite d’alumine ou de gel de silice et la phase mobile qui est le solvant. La chromatographie sur colonne utilise une colonne garnie d’une matrice qui sert à séparer les molécules principalement en fonction de leur taille, de leur affinité ou de leur charge..

CONTENU

1. Aperçu de la chromatographie et des différences clés
2. Qu'est-ce que la chromatographie sur papier?
3. Qu'est-ce que la chromatographie en couche mince?
4. Qu'est-ce que la chromatographie sur colonne?
5. Similarités entre chromatographie sur papier, couche mince et colonne
6. Comparaison côte à côte - Papier vs couche mince vs Chromatographie sur colonne sous forme tabulaire
7. Résumé

Qu'est-ce que la chromatographie sur papier??

La chromatographie sur papier est le type de chromatographie le plus simple utilisé et elle n’est pas utilisée pour des recherches approfondies. Il est principalement utilisé dans les laboratoires d’étudiants pour identifier des biomolécules telles que les acides aminés et les glucides présents dans des mélanges. La chromatographie sur papier utilise une phase stationnaire faite de papier cellulosique ou de papier filtre Whatman et une phase mobile généralement préparée avec des solvants organiques tels que le n-butanol, etc. La phase stationnaire est saturée d’eau, ce qui rend la phase stationnaire liquide. Ainsi, lorsque les composés sont repérés et autorisés à fonctionner en présence de la phase mobile, en fonction de la solubilité des composés, ils sont séparés. Ainsi, lors du développement du chromatogramme, une coloration peut être effectuée pour déterminer la longueur de chaque composé. Le facteur de rétention peut ainsi être calculé.

Figure 01: Chromatographie sur papier

La chromatographie sur papier peut également être classée comme chromatographie sur papier ascendante et chromatographie sur papier descendante, en fonction de la direction du solvant utilisé.

Qu'est-ce que la chromatographie en couche mince??

Chromatographie en couche mince ou TLC est une technique couramment utilisée pour identifier différents acides aminés présents dans un mélange ou pour identifier des protéines. La technique de séparation est basée sur l'adsorption solide-liquide. Lors de la chromatographie en couche mince, une plaque d’alumine ou de gel de silice est utilisée comme phase stationnaire. Le mélange de solvants varie en fonction des besoins et peut utiliser différentes combinaisons de composés organiques tels que le n-butanol, l'acide acétique et l'eau pour préparer le solvant. Les composés à séparer sont déposés sur la plaque et immergés dans le mélange de solvants. Une fois que le solvant remonte en fonction de l'action capillaire donnée par la plaque, les composés repérés sur la plaque se déplacent également en fonction de leur solubilité dans le solvant..

Figure 02: Chromatographie en couche mince

La détection des taches après le chromatogramme est effectuée par différentes procédures de coloration. Certains utilisent la coloration à la ninhydrine qui est une méthode de coloration assez toxique. Les chromatogrammes modernes en couche mince utilisent des techniques de fluorescence pour visualiser le chromatogramme après l'analyse. En fonction des distances parcourues, le temps de rétention de chaque composé peut être calculé. Ceci peut être utilisé pour identifier le type de composé séparé en fonction du mélange utilisé. La CCM est principalement utilisée pour identifier des acides aminés dans un mélange de protéines et également pour séparer différents types de monosaccharides présents dans un mélange..

Qu'est-ce que la chromatographie sur colonne??

La chromatographie sur colonne est un terme général utilisé pour décrire de nombreux types de techniques de chromatographie qui utilisent la méthode de séparation sur colonne. En chromatographie sur colonne, une colonne physique est utilisée avec un matériau de garnissage pour séparer les composés. La séparation peut être basée sur différentes propriétés physiques présentées par les composés. Ces propriétés peuvent être la charge, la taille, la conformation 3D, la capacité de liaison, etc. Ainsi, la colonne garnie du matériau de matrice sert de phase stationnaire et le tampon de lavage appliqué à la colonne sert de phase mobile.

Si les molécules sont séparées en fonction de la taille, le matériau de garnissage est tassé de manière à laisser les pores à travers lesquels les composés peuvent voyager. Ainsi, les plus grosses molécules qui ne peuvent pas traverser les pores sont élues en premier, alors que les plus petites mettent beaucoup plus de temps à éluer..

Figure 03: Chromatographie sur colonne

Si les molécules sont séparées en fonction de leur charge, la phase stationnaire contiendra un échangeur d'anions ou de cations sur lequel les composés seront attirés en fonction de leur charge. Ainsi, lors de l'étape de lavage, les composés non liés seront élués. Lors de l'ajout du tampon d'élution, les composés chargés liés seront élués. La détection de ces éluants repose principalement sur des techniques spectrophotométriques..

Quelles sont les similitudes entre la chromatographie sur couche mince de papier et la chromatographie sur colonne?

• Toutes les techniques de chromatographie sur couche mince et sur colonne de papier sont utilisées pour la séparation de biomolécules telles que les acides aminés, les protéines et les glucides..
• Les techniques de chromatographie sur couche mince et sur colonne de papier ont une phase mobile et une phase stationnaire.
• Les techniques de chromatographie sur couche mince et sur colonne de papier utilisent des mécanismes biophysiques pour la séparation.

Quelle est la différence entre la chromatographie sur couche mince de papier et la chromatographie sur colonne?

Papier vs couche mince vs chromatographie sur colonne
Chromatographie sur papier	La chromatographie sur papier est une technique chromatographique utilisée pour séparer des composés en fonction de leur adsorption liquide-liquide et de leur solubilité. Il utilise un papier de cellulose comme phase stationnaire.
Chromatographie sur couche mince	La chromatographie en couche mince est une autre technique de chromatographie basée sur l’absorption de molécules solide-liquide. Il a une phase stationnaire faite d'alumine ou de gel de silice et un solvant en tant que phase mobile, qui est le solvant.
Chromatographie sur colonne	La chromatographie sur colonne utilise une colonne garnie d’une matrice qui sert à séparer les molécules principalement en fonction de leur taille, de leur affinité ou de leur charge..
État stationnaire
Chromatographie sur papier	Le papier à base de nitrocellulose de Whatman est utilisé comme phase stationnaire en chromatographie sur papier.
Chromatographie sur couche mince	Le gel d’alumine ou de silice est utilisé comme phase stationnaire de la chromatographie en couche mince.
Chromatographie sur colonne	Une colonne garnie d'un matériau de garnissage approprié est utilisée comme phase stationnaire dans la chromatographie sur colonne..
Phase mobile
Chromatographie sur papier	Le solvant courant est la phase mobile de la chromatographie sur papier.
Chromatographie sur couche mince	Le solvant courant est la phase mobile de la chromatographie en couche mince.
Chromatographie sur colonne	Le tampon de lavage est la phase mobile de la chromatographie sur colonne.
Mécanismes utilisés pour la séparation
Chromatographie sur papier	La chromatographie sur papier est basée sur l'absorption solide-liquide.
Chromatographie sur couche mince	La chromatographie en couche mince est basée sur l'absorption solide-liquide.
Chromatographie sur colonne	La chromatographie sur colonne est basée sur l'exclusion de la taille, la charge et la forme.
Tampon d'élution
Chromatographie sur papier	Non requis par la chromatographie sur papier.
Chromatographie sur couche mince	Non requis pour la chromatographie en couche mince.
Chromatographie sur colonne	Requis en chromatographie sur colonne.
Détection
Chromatographie sur papier	Coloration et détermination du facteur de rétention.
Chromatographie sur couche mince	Coloration et détermination du facteur de rétention.
Chromatographie sur colonne	Détermination spectrophotométrique.

Résumé - Papier mince couche vs Colonne Chromatographie

La chromatographie sur papier, la CCM et la chromatographie sur colonne sont des techniques de séparation utilisées pour séparer des biomolécules telles que des protéines, des acides aminés et des glucides (principalement des monosaccharides). La chromatographie sur papier utilise un papier de cellulose comme phase stationnaire et le mécanisme de séparation est basé sur l'adsorption solide-liquide. La CCM utilise également des mécanismes d'adsorption solide-liquide. Les molécules sont séparées sur la phase stationnaire, en fonction de leur solubilité dans la phase mobile. La chromatographie sur colonne utilise des propriétés physiques telles que la taille, la forme, la charge et le poids moléculaire du composé à séparer. La colonne garnie du matériau de matrice sert de phase stationnaire, alors que le tampon de lavage joue le rôle de phase solvant. C'est la différence entre une fine couche de papier et une chromatographie sur colonne.

Référence:

1.Clark, Jim. “CHROMATOGRAPHIE EN COUCHES MINCES.” Chromatographie en couche mince, 2007. Disponible ici 
2.Coskun, Ozlem. «Techniques de séparation: Chromatographie». Cliniques du Nord d'Istanbul, Kare Publishing, 2016. Disponible ici 

Courtoisie d'image:

1. "Réservoir de chromatographie" (CC BY-SA 3.0) via Wikimedia Commons  
2. «Séquence» Par Quantockgoblin, (domaine public) via Wikimedia Commons
3. «Chromatographie sur colonne» (domaine public) via Wikimedia Commons