Différence entre électrophorèse horizontale et verticale sur gel

Différence clé - électrophorèse horizontale ou verticale sur gel
 

L'électrophorèse sur gel est une technique de laboratoire utilisée en génétique pour séparer des mélanges contenant de l'ADN, de l'ARN et d'autres protéines en fonction de leur charge et de leur taille moléculaire respectives. L'ADN, l'ARN ou les protéines qui doivent être séparés selon cette méthode sont passés dans un gel contenant de petits pores. Les molécules sont entraînées à travers le gel par un champ électrique. Les molécules traversent les pores du gel et la vitesse du mouvement est inversement proportionnelle à leur longueur respective. Par conséquent, les molécules de taille moléculaire inférieure se déplaceront plus rapidement que les molécules de poids moléculaire supérieur. Le champ électrique est généré par la différence de charge aux deux extrémités du gel. Une extrémité contient une charge positive et l'autre extrémité une charge négative. Puisque les molécules d’ADN et d’ARN sont chargées négativement, elles seront attirées vers l’extrémité du gel chargée positivement. L'électrophorèse sur gel peut être de deux méthodes différentes: l'électrophorèse horizontale sur gel et l'électrophorèse verticale sur gel. En électrophorèse horizontale sur gel, le gel est présent dans une orientation horizontale et est immergé dans un tampon continu qui se trouve à l'intérieur de la boîte à gel elle-même. En électrophorèse sur gel vertical, le système tampon est orienté verticalement et est discontinu avec deux chambres présentes en haut et en bas avec une cathode et une anode, respectivement.. C’est la principale différence entre l’électrophorèse horizontale et verticale sur gel.

CONTENU

1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que l'électrophorèse horizontale sur gel?
3. Qu'est-ce que l'électrophorèse sur gel vertical?
4. Similarités entre électrophorèse horizontale et verticale sur gel
5. Comparaison côte à côte - électrophorèse horizontale ou verticale sur gel sous forme tabulaire
6. Résumé

Qu'est-ce que l'électrophorèse horizontale sur gel??

L'électrophorèse horizontale sur gel utilise la théorie de base pour séparer les molécules d'ADN, d'ARN ou de protéines en fonction de leur taille et de leur charge moléculaires. Dans cette technique, le gel est présent dans une orientation horizontale et est immergé dans un tampon qui est continu. Le gel d’agarose est utilisé pour séparer la boîte de gel en deux compartiments. Une extrémité de la boîte de gel contient une anode tandis que l'autre extrémité contient une cathode. Lorsqu'un courant est appliqué, le tampon utilisé dans cette technique permet la création d'un gradient de charge. Lorsque la charge est appliquée, le gel a tendance à chauffer. Le tampon fonctionne également comme un liquide de refroidissement, qui maintient la température à des niveaux optimaux. La recirculation du tampon courant empêche la formation d'un gradient de pH. Un système tampon discontinu ne peut pas être utilisé en électrophorèse horizontale sur gel car les deux compartiments du système en gel sont connectés au tampon en cours. L’acrylamide est utilisé lors de l’électrophorèse sur gel pour séparer les mélanges de protéines.

Figure 01: Électrophorèse sur gel horizontal

Dans l'électrophorèse horizontale sur gel, l'acrylamide ne peut pas être utilisé car la boîte de gel est exposée à l'oxygène. En raison de la présence d'oxygène, la polymérisation de l'acrylamide est inhibée, ce qui nuit à la formation du gel. L'électrophorèse horizontale sur gel est une méthode sans effort utilisée dans la séparation de l'ADN et de l'ARN..

Qu'est-ce que l'électrophorèse sur gel vertical??

L'électrophorèse sur gel vertical fonctionne selon la théorie principale de l'électrophorèse sur gel, mais elle est considérée comme plus complexe que la méthode d'électrophorèse sur gel horizontale. Cette technique utilise un tampon discontinu. Une cathode est située dans la chambre supérieure et l'anode est située dans la chambre inférieure. Les électrodes présentes dans chaque compartiment fournissent le champ électrique requis. Une fine couche de gel est coulée entre les deux plaques de verre montées. Par conséquent, la partie supérieure du gel est immergée dans la chambre supérieure et la partie inférieure du gel est immergée dans la chambre au bas. Une fois que le courant est appliqué, une petite partie du tampon se déplace de la chambre supérieure à la chambre inférieure à travers le gel. Le courant appliqué dans cette technique est de minute.

Figure 02: Électrophorèse sur gel vertical

En électrophorèse verticale sur gel, le tampon ne traverse que le gel. Cela permet un contrôle précis du gradient de tension pendant la phase de séparation. Le gel d’acrylamide peut être utilisé car les compartiments ne sont pas exposés à l’oxygène atmosphérique. En raison de la taille plus petite des pores du gel d'acrylamide, une séparation précise peut être obtenue avec une résolution plus élevée.

Quelles sont les similitudes entre l'électrophorèse horizontale et verticale sur gel?

• Les deux systèmes fonctionnent selon la théorie de base de l'électrophorèse sur gel.
• L'anode et la cathode sont utilisées pour fournir le champ électrique requis dans les deux systèmes.

Quelle est la différence entre l'électrophorèse horizontale et verticale sur gel?

Électrophorèse horizontale ou verticale sur gel
L'électrophorèse horizontale sur gel est une technique d'électrophorèse sur gel dans laquelle le gel est présent dans une orientation horizontale..	L'électrophorèse verticale sur gel est une technique d'électrophorèse sur gel dans laquelle le gel est orienté verticalement.
Tampon
L'électrophorèse horizontale sur gel consiste en un tampon continu.	Le tampon courant est discontinu dans l'électrophorèse sur gel vertical.
Utilisation de l'acrylamide
L’acrylamide ne peut pas être utilisé pour l’électrophorèse horizontale sur gel car la boîte de gel est exposée à l’oxygène atmosphérique..	Étant donné que le gel n'est pas exposé à l'oxygène atmosphérique en raison de deux chambres séparées, l'acrylamide pourrait être utilisé pour l'électrophorèse sur gel vertical..
Une fonction
L'électrophorèse horizontale sur gel est plus souvent utilisée pour la séparation de mélanges d'ADN et d'ARN, mais pas de protéines.	L’électrophorèse verticale sur gel est utilisée pour séparer des mélanges de protéines.

Résumé - Électrophorèse horizontale ou verticale sur gel

L'électrophorèse sur gel est une technique de laboratoire largement utilisée dans la séparation de mélanges contenant des molécules d'ADN, d'ARN et de protéines. Il existe deux méthodes d’électrophorèse sur gel: l’électrophorèse horizontale et verticale sur gel. En électrophorèse horizontale sur gel, le tampon de défilement est continu, tandis qu'en électrophorèse verticale sur gel, il est discontinu. C'est la différence entre l'électrophorèse horizontale et verticale sur gel. Les deux systèmes fonctionnent selon le principe commun de l'électrophorèse sur gel.

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Références:

1.Warren, Chad M., et al. «Électrophorèse verticale sur gel d'agarose et électrotransfert de protéines de poids moléculaire élevé.» Electrophoresis, vol. 24, non. 11, 2003, p. 1695-1702., Doi: 10.1002 / elps.200305392.
2. «Systèmes de gels horizontaux et verticaux - Le système de gels horizontaux». National Diagnostics, Disponible ici. Consulté le 28 août 2017.

Courtoisie d'image:

1. “Appareil d'électrophorèse sur gel” de Jeffrey M. Vinocur - Travail personnel (CC PAR 2.5) via Wikimedia Commons
2. «Electrophorèse sur gel de protéines de polyacrylamide» par Jean-Etienne Minh-Duy Poirrier de Bruxelles, Belgique - Protéines dans une électrophorèse sur gel 1D (CC BY-SA 2.0) via Wikimedia Commons