Différence entre la nitrocellulose et le PVDF

Différence clé - nitrocellulose vs PVDF
 

Le Western Blot est une méthode qui permet la détection et la quantification de protéines spécifiques à partir d'un échantillon de protéine. La fiabilité de la technique dépend du choix d’une membrane adéquate pour l’absorption des protéines du gel. Il existe différents types de membranes microporeuses. Les membranes de nitrocellulose et de PVDF sont deux de ces membranes préférées par les chercheurs en raison de leurs attributs particuliers par rapport aux autres types de membranes. Le choix entre la nitrocellulose et le PVDF constitue également un autre défi pour le Western Blot. La nitrocellulose et le PVDF ont tous deux une grande capacité d’absorption des protéines. La principale différence entre la membrane de nitrocellulose et de PVDF est que Les membranes de nitrocellulose n'ont pas la capacité d'éliminer les anticorps et de réutiliser les membranes pour la reproduction des anticorps, tandis que les membranes de PVDF possèdent des capacités d'élimination et de réutilisation..

CONTENU
1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que la nitrocellulose?
3. Qu'est-ce que le PVDF?
4. Comparaison côte à côte - nitrocellulose et PVDF
5. Résumé

Qu'est-ce que la nitrocellulose??

La nitrocellulose est un polymère fabriqué en traitant la cellulose avec de l'acide nitrique et est utilisé pour fabriquer des membranes microporeuses en biologie moléculaire, en particulier pour les techniques de transfert telles que le transfert de type sud, nord et ouest. La taille des pores des membranes de nitrocellulose va de 3 à 20 µm. Les membranes microporeuses en nitrocellulose facilitent la détection des réactions immunochimiques se produisant à la surface de la membrane. Par conséquent, les membranes de nitrocellulose sont fréquemment utilisées pour l’immobilisation de protéines et la détection de protéines spécifiques dans le Western Blot. Les membranes de nitrocellulose peuvent également immobiliser les glycoprotéines et les acides nucléiques.

Les membranes de nitrocellulose sont préférées dans les analyses à flux latéral en raison de plusieurs caractéristiques. Les membranes de nitrocellulose absorbent les protéines à une concentration élevée. Le solvant utilisé pour mouiller la membrane ne diminue pas l'absorption des protéines membranaires par la nitrocellulose. Les membranes de nitrocellulose peuvent être facilement coupées à la taille de gel souhaitée et transférer des protéines du gel à la membrane par transfert électrique ou capillaire. La nitrocellulose permet un écoulement plus rapide des protéines à travers la membrane avec un potentiel de liaison élevé. La nitrocellulose présente une résistance améliorée à la manipulation. Un autre attribut spécial de la membrane de nitrocellulose est qu’elle peut être facilement collée avec des adhésifs non solvants à base d’eau sur divers supports en plastique..

Figure 01: Membrane de nitrocellulose pour western blot

Qu'est-ce que le PVDF??

Le polyfluorure de vinylidène (PVDF) est un polymère fluoré produit par la polymérisation du difluorure de vinylidène et présente une grande capacité d’immobilisation des protéines. Par conséquent, les membranes microporeuses fabriquées à partir de PVDF sont utilisées dans les techniques de Western Blot pour analyser des protéines spécifiques à partir de mélanges de protéines. Les membranes en PVDF peuvent également être utilisées pour l'analyse des acides aminés et le séquençage des protéines. La caractéristique la plus importante de la membrane de PVDF par rapport à la membrane de nitrocellulose est qu’elle peut être facilement séparée des anticorps et réutilisée pour des sondes d’anticorps ultérieures..

Les membranes de PVDF sont plus épaisses que les membranes de nitrocellulose; par conséquent, plus résistant aux dommages lors de la réutilisation. Les membranes de PVDF sont hautement hydrophobes. Par conséquent, ils doivent être trempés dans du méthanol ou de l'isopropanol avant utilisation.

Quelle est la différence entre la nitrocellulose et le PVDF?

Nitrocellulose vs PVDF
La nitrocellulose est un polymère composé de cellulose.	Le PVDF est un polymère fluoré produit par la polymérisation du difluorure de vinylidène..
Taille des pores de la membrane
Les tailles de pores typiques sont 0,1, 0,2 ou 0,45 µ	Les tailles de pores typiques sont 0,1, 0,2 ou 0,45 µm
Capacité de liaison aux protéines
La nitrocellulose a une capacité de liaison aux protéines de 80 à 100 µg / cm2.	Le PVDF a une capacité de liaison aux protéines de 170 à 200 µg / cm2.
Sensibilité
Cela a une faible sensibilité par rapport au PVDF.	Cela a une grande sensibilité.
Détection de protéines faiblement exprimées
La sensibilité étant faible dans les membranes de nitrocellulose, elle ne convient pas à la détection des protéines faiblement exprimées..	Ceci est plus approprié pour la détection de protéines faiblement exprimées en raison de sa haute sensibilité..
Bruit de fond
Cela a moins de bruit de fond	Cela a plus de bruit de fond.
Interactions avec les protéines
Les molécules de protéines se lient aux membranes de nitrocellulose par des interactions hydrophobes.	Les protéines se lient aux membranes de PVDF par des interactions hydrophobes et dipolaires.
Nature de la membrane
La nitrocellulose est fragile et fragile. Cependant, des versions de nitrocellulose sont disponibles et elles sont résistantes.	Le PVDF est plus durable et a une plus grande résistance chimique.
Capacité à déshabiller et à réutiliser
La nitrocellulose peut avoir des difficultés à se déshabiller et se reproduire sans perdre le signal.	Le PVDF est idéal pour les applications de reprographie et de séquençage.
Pertinence
La nitrocellulose est idéale pour détecter les protéines de faible poids moléculaire.	Le PVDF convient mieux à la détection de protéines de poids moléculaire élevé.
Autres utilisations
La nitrocellulose peut être utilisée pour l’analyse d’acides nucléiques et le transfert de points / fentes..	Le PVDF peut être utilisé pour le séquençage de protéines et les systèmes de dosage en phase solide.
Coût
C'est moins cher que les membranes de PVDF.	Ceci est plus cher que les membranes de nitrocellulose.
Besoin de pré-mouillage
Les membranes de nitrocellulose ne nécessitent pas de trempage au méthanol	Les membranes de PVDF nécessitent un trempage préalable avec du méthanol.

Résumé - Nitrocellulose vs PVDF

Les membranes de nitrocellulose ont été les premières membranes utilisées dans le commerce pour le dosage à flux latéral. Ils ont une grande capacité d'absorption des protéines. Par conséquent, les membranes de nitrocellulose sont utilisées dans le Western Blot. Le PVDF est un autre type de membrane utilisé dans le Western Blot et possède également une grande capacité d’absorption des protéines. Les deux types sont utilisés dans le Western Blot pour l'analyse des protéines. Cependant, les membranes de PVDF ont des attributs plus spéciaux, ce qui les rend plus appropriées que les membranes de nitrocellulose pour le transfert Western. Cependant, les membranes de nitrocellulose conviennent mieux à la détection de protéines de faible poids moléculaire, tandis que les membranes de PVDF conviennent mieux à la détection de protéines de haut poids moléculaire. C’est la différence entre les membranes de nitrocellulose et de PVDF.

Courtoisie d'image:
1. "Western blot transfer" De Bensaccount sur Wikipedia anglais (CC BY 3.0) via Wikimedia Commons

Référence:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun et Thomas A. Neubert. “Utilisation de membranes de nitrocellulose pour la caractérisation des protéines par spectrométrie de masse par désorption / ionisation laser assistée par matrice.” Chimie analytique. Bibliothèque nationale de médecine des États-Unis, 15 juillet 2006. Web. 28 mars 2017
2. "Marqueurs moléculaires et biotechnologie végétale". Google Books. N.p., n.d. Web. 28 mars 2017
3.Lundi, 8 avril 2013 Tweet. «La magie est dans la membrane: choisissez judicieusement pour obtenir les meilleurs résultats de transfert Western.» Biocompare. N.p., 08 avril 2013. Web. 28 mars 2017