Différence entre la page SDS et la page native

Différence clé - SDS Page vs Native Page
 

SDS et page native sont deux types de techniques d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide utilisées en biologie moléculaire. le différence clé entre SDS Page et Native Page correspond au type de gel de polyacrylamide utilisé. SDS Page utilise un gel dénaturant. Par conséquent, les molécules sont séparées en fonction de leur poids moléculaire. En revanche, dans Native Page, des gels non dénaturants sont utilisés. Par conséquent, les molécules sont séparées en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme..

L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide (Page) utilise un gel obtenu en polymérisant des monomères d'acrylamide avec du méthylène bisacrylamide. Le polyacrylamide est plus dur et plus stable à la chaleur que l'agarose. Les gels de polyacrylamide ont une taille de pore plus petite qui permet une séparation efficace des protéines. Il existe deux principaux types de configurations de page, à savoir SDS Page et Native Page. Page SDS ou Electrophorèse sur gel de polyacrylamide, sulfate de sodium et de dodécyle sépare les protéines en fonction de leurs poids moléculaires. Les gels dénaturants sont utilisés dans la page SDS. Native Page utilise des gels non dénaturants et sépare les protéines en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme (conformation 3D).

CONTENU

1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que la page SDS?
3. Quelle est la page autochtone
4. Similarités entre la page SDS et la page native
5. Comparaison côte à côte - SDS Page vs Native Page sous forme tabulaire
6. Résumé

Qu'est-ce que la page SDS??

SDS Page est la technique électrophorétique la plus courante utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Le gel est fabriqué en ajoutant du SDS (dodécyl sulfate de sodium), qui est un détergent. SDS denture les protéines en monomères. Le SDS est un détergent anionique. Par conséquent, il ajoute une charge négative nette aux protéines dans une large plage de pH. Lorsque la charge négative nette est conférée aux molécules de protéine, en raison de la variation de la charge, les structures complexes sont décomposées. En raison de la charge négative, les protéines s’attirent vers le côté positif. Ainsi, les molécules de poids moléculaire inférieur voyagent plus rapidement sur la matrice de gel et peuvent être observées près de l'anode, alors que les protéines de poids moléculaire élevé sont observées plus près des puits..

Figure 01: page SDS

La liaison du SDS à la chaîne polypeptidique est proportionnelle à sa masse moléculaire relative. Par conséquent, la masse moléculaire peut également être déterminée via SDS Page. La coloration des gels SDS Page est effectuée par coloration au bleu de bromophénol. Les applications de pages SDS sont plus étendues et peuvent être utilisées pour estimer la masse moléculaire relative et déterminer l'abondance relative des protéines dans un mélange de protéines. SDS Page peut également être utilisé pour déterminer la distribution des protéines dans un mélange de protéines. SDS Page est également utilisé pour purifier et évaluer les protéines. Il est utilisé comme procédure préliminaire pour le Western Blot et l'hybridation, qui est utilisé pour la cartographie et l'identification des protéines..

Quelle est la page autochtone?

L 'électrophorèse en gel de Polyacrylamide natif (Native Page) utilise un gel non dénaturant. Par conséquent, le SDS ou tout autre agent dénaturant n'est pas ajouté à la matrice de gel. Dans Native Page, la séparation des protéines est basée sur la charge et la taille de la protéine. Par conséquent, la mobilité de la protéine dépend de la charge et de la taille de la protéine.

La charge de la protéine dépend des chaînes latérales des acides aminés. Si les chaînes latérales sont chargées négativement, la protéine recevra une charge négative globale et inversement. Les protéines conservent une conformation 3D en raison du repliement qui a lieu. Le pliage résulte de plusieurs types de liaisons dans des protéines telles que les liaisons disulfure, les interactions hydrophobes et les liaisons hydrogène. Par conséquent, si la page native est portée à un pH neutre, les protéines seront séparées en fonction de la forme moléculaire de la protéine. Par conséquent, Native Page peut être utilisé comme une technique sensible pour détecter le changement de charge ou la conformation de la protéine..

Le principal avantage de la page native est que la protéine utilisée pour l'analyse de la page peut être récupérée dans son état d'origine après l'analyse de la page, car la protéine n'est pas perturbée au cours du processus. Native Page est une technique à débit relativement élevé, et la stabilité de la protéine est augmentée.

Figure 02: Page native

Une fois le gel terminé, vous pouvez visualiser le gel Native Page en le colorant avec du bleu de bromophénol ou tout autre réactif de coloration approprié. Les applications de Native Page incluent la séparation de protéines acides, notamment des glycoprotéines telles que l'érythropoïétine recombinante humaine, ou l'identification de protéines présentes dans l'albumine de sérum bovin (BSA)..

Quelles sont les similitudes entre les pages SDS et Native?

• Les systèmes SDS Page et Native Page utilisent tous deux du gel de Polyacrylamide comme matrice du gel..
• Les deux sont utilisés pour la séparation et l'identification des protéines.
• Les deux utilisent la mobilité électrophorétique pour séparer les composés.
• Les deux peuvent être effectués de manière verticale ou horizontale (principalement en tant que configurations de page verticales car la longueur de la plage est supérieure).
• L'appareil d'électrophorèse comprenant le réservoir de gel, les peignes, l'alimentation est nécessaire au fonctionnement des deux techniques.
• La visualisation du gel peut être effectuée par des méthodes de coloration dans les deux techniques.

Quelle est la différence entre une page SDS et une page native?

SDS Page vs Native Page
SDS Page ou Sodium-dodecyl sulfate Page sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire et utilise un gel dénaturant.	Native Page utilise des gels non dénaturants et sépare les protéines en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme (conformation 3D).
Type de gel
Un gel dénaturant est utilisé dans SDS-page.	Un gel non dénaturant est utilisé dans la page native.
Présence de SDS
SDS est présent en tant que détergent pour conférer une charge négative à l’échantillon dans la page SDS.	SDS n'est pas présent dans la page native.
Base de séparation
La séparation des protéines dépend du poids moléculaire de la protéine dans la page SDS..	La séparation dépend de la taille et de la forme de la molécule de protéine dans la page native..
Stabilité de la protéine
La stabilité de la protéine est faible dans la page SDS.	La stabilité des protéines est élevée dans la page native.
Récupération de la protéine d'origine
Pas possible car il est dénaturé dans la page SDS.	Possible sur la page native.

Résumé - SDS Page vs Native Page

SDS Page et Native Page sont deux types de techniques d'électrophorèse sur gel de Polyacrylamide utilisées pour séparer les protéines. SDS Page est traitée avec un détergent appelé SDS. Le SDS confère une charge négative globale à la protéine, ce qui aboutit à la dénaturation de la protéine. Par conséquent, les protéines sont séparées en fonction de leur poids moléculaire. En revanche, la technique Native Page n’utilise aucun agent de dénaturation. Ainsi, les protéines sont soit séparées en fonction de leur taille ou de leur forme. C'est la différence entre la page SDS et la page native.

Référence:

1. «Principe et méthode de l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE)». Principe et méthode de l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Disponible ici
2. “Native Gels.” Alliance Protein Laboratories | Services de caractérisation biophysique. Disponible ici  

Courtoisie d'image:

1.'SDS-PAGE Electrophoresis'By Bensaccount sur Wikipedia anglais, (CC BY 3.0) via Wikimedia Commons  
2. 'Charger un échantillon dans un puits d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide' Par Blaz Nemec de Ljubljana, Slovénie (CC BY-SA 2.0) via Wikimedia Commons