Différence entre la page SDS et Western Blot

Différence clé - SDS Page vs Western Blot
 

Western blot est une technique qui détecte une protéine spécifique à partir d'un échantillon de protéine. Cette technique est réalisée en plusieurs étapes clés: électrophorèse sur gel, transfert et hybridation.. Electrophorèse sur gel de polyacrylamide de dodécyl sulfate de sodium (SDS Page) est une sorte de technique d'électrophorèse sur gel utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur taille (poids moléculaires). Western blot est une feuille spéciale d'une membrane de transfert utilisée pour transférer le même motif des protéines dans la page SDS. La principale différence entre SDS Page et Western Blot est que SDS Page permet la séparation des protéines dans un mélange tandis que Western blot permet la détection et la quantification d'une protéine spécifique d'un mélange. Les deux sont utiles dans les études d'analyse de protéines.

CONTENU
1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que la page SDS?
3. Qu'est-ce que Western Blot?
4. Comparaison côte à côte - SDS Page vs Western Blot
5. Résumé

Qu'est-ce que la page SDS??

SDS Page est une technique d’électrophorèse sur gel utilisée pour la séparation des protéines. Il est couramment utilisé en biochimie, génétique, criminalistique et biologie moléculaire. Une fois les protéines extraites de l'échantillon, elles sont traitées sur un gel constitué de SDS et de Polyacrylamide. Le SDS est un détergent anionique utilisé pour linéariser les protéines (dénaturer les protéines) et pour conférer aux protéines linéarisées une charge négative proportionnelle à leur masse moléculaire. Le polyacrylamide devient le support solide du gel. Les protéines dénaturées chargées négativement migrent vers le côté positif de l'appareil à travers le gel. Selon la taille des protéines, les vitesses de migration diffèrent d'une protéine à l'autre et une séparation est effectuée. Par conséquent, la page SDS est utile pour la séparation de protéines individuelles en fonction de leur taille..

La préparation du gel de Polyacrylamide pour le fractionnement des protéines est une étape cruciale dans SDS Page. La concentration correcte de polyacrylamide et le type d'agent de réticulation utilisé affectent fortement les propriétés physiques du gel, ce qui facilite la séparation des différentes protéines. La taille des pores du gel doit être correctement gérée pour une séparation efficace. Cependant, SDS Page est considérée comme une technique de séparation de protéines haute résolution..

La technique SDS Page a une limite majeure dans l'analyse des protéines. Étant donné que le SDS dénature les protéines avant la séparation, il ne permet pas la détection d'activité enzymatique, d'interactions de liaison aux protéines, de cofacteurs de protéines, etc..

Figure 01: page SDS

Qu'est-ce que Western Blot??

La technique de Western blot permet de détecter une protéine spécifique à partir d'un mélange de protéines et de mesurer la quantité et le poids moléculaire de la protéine. Le Western Blot est la membrane utilisée lors de la procédure de transfert pour obtenir l'image miroir des profils de protéines dans le gel de SDS-polyacrylamide. La membrane utilisée pour le Western Blot est principalement composée de nitrocellulose ou de polyvinylidène difluorure (PVDF). La membrane avec la protéine transférée peut être utilisée pour identifier la protéine souhaitée. Il nécessite des anticorps de haute qualité pour la détection de la protéine souhaitée par hybridation. L'anticorps se lie à son antigène spécifique et révèle la présence de l'antigène souhaité qui est une protéine.

Le transfert des protéines du gel de polyacrylamide SDS au transfert Western est effectué par électrotransfert. C'est une méthode efficace et rapide qui provoque l'électrophorèse des protéines hors du gel et leur passage sur la membrane de nitrocellulose (Western blot)..

Figure 02: Western Blot

Quelle est la difference entre SDS Page et Western Blot?

SDS Page vs Western Blot
SDS Page est une technique d'électrophorèse sur gel.	Le Western blot est une technique réalisée sur une membrane pour détecter une protéine spécifique d'un mélange.
Utilisation
La page SDS permet de séparer les protéines en fonction de leur taille.	Western blot permet le transfert de protéines sur le gel de page SDS sans changer de motif et permet l'hybridation avec des anticorps spécifiques.
Désavantages
La dénaturation des protéines, le coût élevé et la présence de produits chimiques à base de neurotoxines sont les inconvénients de cette technique..	Cette technique prend beaucoup de temps et nécessite une bonne expérience personnelle et des conditions contrôlées spécifiques.

Résumé - SDS Page vs Western Blot

Les pages SDS et Western blot sont deux méthodes impliquées dans l'analyse des protéines. SDS Page permet une séparation facile des protéines sur un gel en fonction de leur poids moléculaire. Western blot aide à confirmer la présence et la quantité d'une protéine spécifique par hybridation avec des anticorps spécifiques. C’est la différence entre SDS Page et Western Blot.

Références:
1. Blancher, C. et A. Jones. «SDS -PAGE et Western Blotting Techniques». Méthodes en médecine moléculaire. Bibliothèque nationale de médecine des États-Unis, n.d. Web. 27 mars 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig et David H. Petering. “Native SDS-PAGE: Séparation électrophorétique à haute résolution de protéines avec rétention de propriétés natives, y compris les ions de métal lié.” Métallomique: science du biométal intégrée. Bibliothèque nationale de médecine des États-Unis, mai 2014. Web. 27 mars 2017.

Courtoisie d'image:
1. “SDS-PAGE Electrophoresis” de Bensaccount sur Wikipedia anglais (CC BY 3.0) via Wikimedia Commons
2. “Western blot 114A” de Amanthabagdon - Travail personnel (domaine public) via Wikimedia Commons