Comment l'électrophorèse sur gel sépare-t-elle des fragments d'ADN?
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L'électrophorèse sur gel est une technique utilisée pour séparer des macromolécules telles que l'ADN, l'ARN et les protéines.. Les molécules d’ADN et d’ARN sont séparées en fonction de leur taille, tandis que les protéines sont séparées en fonction de la taille et de la charge.. L'électrophorèse sur gel d'agarose est la technique utilisée pour séparer l'ADN et l'ARN. Des fragments d'ADN de 100 pb à 25 kb peuvent être séparés par électrophorèse sur gel d'agarose. En général, les ADN sont des molécules chargées positivement car ils possèdent des charges négatives dans leurs groupes phosphate. Ainsi, l'ADN migre vers l'électrode positive lors de l'électrophorèse sur gel.
Zones clés couvertes
1. Qu'est-ce que l'électrophorèse sur gel?
- Définition, électrophorèse sur gel d'agarose, PAGE
2. Comment l'électrophorèse sur gel sépare-t-elle des fragments d'ADN?
- Principe de séparation de l'ADN
Mots clés: électrophorèse sur gel d’agarose, distance migrée, ADN, PAGE, pores, électrode positive, taille
Qu'est-ce que l'électrophorèse sur gel?
L'électrophorèse sur gel est une technique utilisée pour séparer des fragments de macromolécules tels que l'ADN, l'ARN et les protéines en fonction de leur taille et de leur charge. L'ADN et l'ARN possèdent une charge négative égale dans toute la molécule en raison de la présence de groupes phosphate chargés négativement. Par conséquent, l'ADN et l'ARN migrent tous deux vers l'électrode positive sous un champ électrique. en outre, électrophorèse sur gel d'agarose est la technique utilisée pour séparer l’ADN et l’ARN en fonction de leur taille. La séparation des fragments d’ADN par électrophorèse sur gel est montrée dans Figure 1.
Figure 1: Fragments d'ADN séparés
La technique électrophorétique sur gel utilisée pour séparer les protéines est électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE). Les protéines utilisées dans cette technique sont séparées en fonction de leur taille et de leur charge. PAGE peut être utilisé pour séparer des fragments d'ADN avec des différences de paires de bases car le pouvoir de séparation de PAGE est supérieur à celui de l'électrophorèse sur gel d'agarose..
Comment l'électrophorèse sur gel sépare-t-elle des fragments d'ADN?
Au cours de l'électrophorèse sur gel d'agarose, les échantillons d'ADN sont mélangés au colorant de chargement et sont chargés dans les puits du gel d'agarose. Le tampon de chargement contient des colorants de suivi qui permettent de visualiser le mouvement de l’échantillon d’ADN sur le gel. Ensuite, un champ électrique est appliqué aux deux extrémités du gel. L'échantillon d'ADN migre vers l'électrode positive. La vitesse de migration sur le champ électrique dépend de la taille du fragment d'ADN. Les molécules d'ADN avec un grand nombre de paires de bases migrent lentement tandis que les molécules avec moins de paires de bases migrent rapidement à travers le gel. Par conséquent, l'électrophorèse sur gel permet la séparation des fragments d'ADN en fonction de leur taille. Ceci produit une série de fragments d’ADN avec des tailles dans l’ordre décroissant.. La relation entre la distance de migration et la taille du fragment d’ADN est montrée dans Figure 2.
Figure 2: Relation entre la distance migrée et la taille du fragment d'ADN
Le gel d'agarose contient des pores de taille égale à travers lesquels les fragments d'ADN migrent. Par conséquent, les petits fragments d'ADN migrent rapidement à travers le pore, mais les grands fragments d'ADN mettent un certain temps à migrer à travers eux. Après avoir parcouru une distance considérable, le gel d'agarose est visualisé sous UV. Le gel d'agarose étant additionné d'une substance de coloration de l'ADN sous UV appelée bromure d'éthidium, les fragments d'ADN sont emmêlés dans la tache, ce qui permet la visualisation. Pour déterminer la taille du fragment d’ADN, les échantillons sont passés avec une échelle contenant une série de fragments d’ADN de taille connue..
Conclusion
L'électrophorèse sur gel est une technique utilisée pour séparer des molécules d'ADN, d'ARN ou de protéines en fonction de leur taille et de leur charge. L'électrophorèse sur gel d'agarose est la technique largement utilisée pour la séparation de l'ADN basée sur la taille de la molécule. Au cours de la migration des molécules d’ADN à travers les pores du gel d’agarose, elles sont séparées en fonction de la taille..
Référence:
1. "Électrophorèse sur gel." Académie Khan, Disponible ici.
Courtoisie d'image:
1. “ADN fragmendid etiidiumbromiidiga värvitud agaroosgeelis” de Rainis Venta - Travail personnel (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2. “Electrophorèse sur gel” de Mckenzielower - Travail personnel (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
