Différence entre immunofluorescence et immunohistochimie

Différence clé - Immunofluorescence vs Immunohistochimie
 

Le diagnostic des maladies, qui utilise des méthodes de biologie moléculaire, est devenu un domaine émergent de la technologie des laboratoires cliniques. Il comprend tous les tests et méthodes permettant d'identifier une maladie et de comprendre la cause d'une maladie en analysant l'ADN, l'ARN ou les protéines exprimées dans un organisme. Les progrès rapides du diagnostic moléculaire ont permis la recherche fondamentale sur les maladies transmissibles et non transmissibles. Ceux-ci sont utilisés pour déterminer les changements dans les niveaux de séquence ou d'expression dans des gènes ou protéines cruciaux impliqués dans une maladie. L'immunofluorescence (IF) et l'immunohistochimie (IHC) sont deux techniques largement utilisées en biologie du cancer.. L'IF est un type d'IHC dans lequel une méthode de détection de fluorescence est utilisée pour analyser les anticorps monoclonaux et polyclonaux, tandis que l'IHC utilise des méthodes chimiques pour détecter les anticorps monoclonaux et polyclonaux.. C'est la principale différence entre IF et IHC.

CONTENU

1. Vue d'ensemble et différence clé
2. Qu'est-ce que l'immunofluorescence? 
3. Qu'est-ce que l'immunohistochimie?
4. Similarités entre immunofluorescence et immunohistochimie
5. Comparaison côte à côte - Immunofluorescence vs Immunohistochimie sous forme tabulaire
6. Résumé

Qu'est-ce que l'immunofluorescence (IF)??

L'immunofluorescence est une technique de détection dans laquelle les anticorps utilisés dans l'analyse sont marqués à l'aide de colorants fluorescents ou de protéines fluorescentes à des fins de détection. Les anticorps secondaires marqués peuvent entraîner des signaux de fond indésirables; par conséquent, la technique IF est basée sur le marquage de l'anticorps primaire lui-même à l'heure actuelle afin d'éviter les signaux indésirables lors de la détection. Grâce à cette technique, la liaison non spécifique entre l'anticorps primaire et l'anticorps secondaire est empêchée et elle est plus rapide car aucune étape d'incubation secondaire n'est impliquée. La qualité des données est également améliorée.

Figure 01: Double coloration par immunofluorescence pour BrdU, NeuN et GFAP

Les fluorochromes ou les colorants fluorescents sont des composés capables d'absorber le rayonnement, de préférence le rayonnement ultraviolet excité. Lorsque les particules atteignent l'état fondamental à partir de l'état excité, elles émettent un rayonnement qui est capturé et détecté par un détecteur pour former un spectre. Il est très important que le marqueur fluorescent soit compatible et stable pour la réaction particulière et qu'il soit correctement conjugué à l'anticorps afin d'obtenir des résultats précis. L'un des fluorochromes les plus utilisés est l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC), de couleur verte, avec des longueurs d'onde maximales d'absorption et d'émission de 490 nm et 520 nm, respectivement. La rhodamine, un autre agent utilisé dans les IF, est de couleur rouge et présente des longueurs d'onde maximales d'absorption et d'émission de 553 nm et 627 nm..

Qu'est-ce que l'immunohistochimie (IHC)??

L'IHC est une méthode de test moléculaire utilisée pour identifier et confirmer la présence de l'antigène dans la cellule cible. La cellule cible peut être une particule infectieuse, un agent pathogène microbien ou une cellule tumorale maligne. L'IHC utilise des anticorps monoclonaux et polyclonaux pour déterminer la présence d'antigènes présents à la surface des cellules cibles. La technique est basée sur la liaison antigène-anticorps. Un marqueur de détection est conjugué à ces anticorps afin de détecter la présence ou l'absence de l'antigène particulier. Ces marqueurs peuvent être des marqueurs chimiques tels que des enzymes, des anticorps marqués par fluorescence ou des anticorps radio-marqués..

Figure 02: Tranche cérébrale de souris colorée par immunohistochimie

L'application la plus populaire d'IHC est la biologie des cellules cancéreuses pour identifier la présence de tumeurs malignes, mais elle est également utilisée pour la détection de maladies infectieuses..

Quelles sont les similitudes entre l'immunofluorescence et l'immunohistochimie?

• L'immunofluorescence et l'immunohistochimie ont lieu dans des conditions in vitro.
• Les deux techniques sont basées sur l'antigène-anticorps
• Les deux sont des techniques très rapides.
• Les résultats des techniques sont reproductibles.
• Les deux ont amélioré la qualité des données.
• Ces techniques utilisées dans le diagnostic du cancer et des maladies infectieuses.

Quelle est la différence entre l'immunofluorescence et l'immunohistochimie?

Immunofluorescence vs Immunohistochimie
IF est une technique de détection dans laquelle les anticorps utilisés dans le test sont marqués à l'aide de colorants fluorescents ou de protéines fluorescentes pour la détection..	L'IHC est une technique de détection dans laquelle les anticorps utilisés dans le test sont étiquetés à l'aide de produits chimiques ou d'éléments radioactifs pour la détection..
Précision
La précision est plus élevée dans la technique IF comparée à l'IHC.	La précision est inférieure dans l'IHC.
Spécificité
IF est plus spécifique.	IHC est moins spécifique.

Résumé - Immunofluorescence vs Immunohistochimie

Les mécanismes moléculaires ont entraîné de nombreux changements dans le domaine de la médecine, donnant lieu à des méthodes de tests moléculaires avancées qui ont provoqué des révolutions dans le domaine du diagnostic. Ces inventions ont permis une identification et une confirmation rapides et précises de la maladie, permettant ainsi une administration et une production réussies des médicaments. Ces techniques sont également utilisées en pharmacologie afin de rechercher les cibles des médicaments et de confirmer les propriétés pharmacocinétiques du médicament au cours du métabolisme du médicament. IF et IHC sont deux méthodes de diagnostic basées sur le concept de liaison antigène / anticorps, bien que le mode de détection dans les deux techniques diffère. IF utilise le principe de fluorescence pour détecter l'antigène et IHC utilise le concept de conjugaison chimique pour détecter l'antigène. C'est la différence entre IF et IHC.

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Références:

1. Aoki, Valéria et al. “Immunofluorescence directe et indirecte.” Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, Disponible ici. Consulté le 25 août 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha et al. “Applications of immunohistochemistry.” Journal de la pharmacie et des sciences biologiques, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, août 2012, Disponible ici. Consulté le 25 août 2017.

Courtoisie d'image:

1. «Double coloration par immunofluorescence pour BrdU, NeuN et GFAP» Par Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2e, Liu X. - Administration intranasale du facteur de croissance transformant - beta1 chez les souris après un AVC réduit le volume de l'infarctus et augmente la neurogenèse dans la zone sous-ventriculaire; PMID 19077183 (CC BY 2.0) via Wikimedia Commons
2. “Hypothalamus d'un tissu de souris coloré par ABC-Immunohistochimie” Par zabbn - Travail personnel (CC BY-SA 3.0) via Wikimedia Commons